WIP組織細胞裂解液

英文名稱：WIP(Tissue and Cell lysis Reagent)
中文名稱：WIP組織細胞裂解液
別    名：Tissue and Cell Lysis Reagent.  
規(guī)格：30ml  60ml  100ml
保存條件：-20°C保存，一年有效

產(chǎn)品介紹

一. WIP組織細胞裂解液使用說明書
產(chǎn)品簡介
WIP組織細胞裂解液(Tissue and Cell lysis solution for Western Blot and Immunoprecipitation )，是一種在非變性條件下裂解細胞的裂解液。本產(chǎn)品裂解細胞獲得的裂解產(chǎn)物，可用于PAGE，蛋白印跡（Western Blot），免疫沉淀(immnolprecipitation，IP),免疫共沉淀(co-IP) 和蛋白與多肽的分離純化。
WIP裂解液的主要成分為Tris(pH 7.5，20mM)，150mM NaCl，去垢劑Triton X-100以及多種蛋白酶抑制劑,無需自備PMSF、磷酸酶抑制劑等蛋白酶抑制劑。WIP不僅可以用于細胞培養(yǎng)物的裂解，也可直接用于大多數(shù)動物組織的裂解。在有效地裂解組織和細胞的同時，可強烈地抑制蛋白、多肽的降解，并保持原有的分子結(jié)構(gòu)和蛋白間相互作用。
用WIP裂解得到的組織細胞蛋白樣品，可以用博奧森生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質(zhì)，不能用Bradford試劑盒測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
包裝清單
WIP組織細胞裂解液 30ml 
PMSF（100X） 0.3ml 
保存條件：
-20°C保存，一年有效。 
注意事項：
1．為獲得最佳的實驗效果，可適當分裝使用，以盡量避免反復(fù)凍融。
2．PMSF應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)加。
3．裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4°C進行。
4．蛋白酶抑制劑均有較高的毒性，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。一旦直接接觸，請立即用流水沖洗，再向醫(yī)療保健結(jié)構(gòu)咨詢。

二.使用方法說明
1．培養(yǎng)細胞
取出WIP裂解液，待融化后，顛倒混勻數(shù)次，適量分裝凍存。在使用前取出，按比例加入PMSF（使其最終濃度為1mM），混勻，立即使用。
貼壁細胞，去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗2-3遍(如血清中的蛋白沒有干擾，也可以不洗)。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入WIP。用槍吹打數(shù)下，使WIP和細胞充分接觸。通常WIP接觸細胞數(shù)秒后細胞就會被裂解。
懸浮細胞，收集培養(yǎng)細胞，離心去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗2-3遍(如血清中的蛋白沒有干擾，也可以不洗)，用手指把細胞用力彈散，按6孔板每孔細胞加入100-200微升的比例加入WIP。如果細胞數(shù)量較大，應(yīng)按50-100萬細胞/管分裝或根據(jù)細胞數(shù)量按比例增加WIP。用手指輕彈管底以促進WIP和細胞充分接觸，裂解完全時應(yīng)無明顯的細胞顆粒。
裂解物經(jīng)10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入100微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150微升或200微升。
2．組織樣品
取Ep管，分別稱重標記，把組織剪切成小塊裝入Ep管中，稱重。按每20毫克組織加100-200微升的比例加入WIP(如裂解不完全，可以適當增加WIP的用量；如需要的蛋白樣品濃度較高，可以適當減少WIP的用量)。用手握式電動組織細胞勻漿器勻漿約1分鐘或直至充分裂解。10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
如果組織樣品本身非常細小，如淋巴細胞，可直接加入WIP裂解，通過振蕩（Vortex）以使樣品裂解完全