?植物綠色熒光蛋白（GFP）ELISA檢測試劑盒

貨號：ZK-H4105
品牌：子科生物ZIKER；
檢測方法：酶聯(lián)免疫分析檢測法；
規(guī)格：48T/96T；
包裝：盒；
有效期：6個月；
保存溫度： 2-8℃;
應用范圍：僅供科研研究實驗使用，不可用于臨床診斷使用；
可檢測樣品形式：葉片、葉莖、葉桿、根部等植物組織樣本。

一、檢測范圍、 OD值：具體請咨詢在線客服 ，或者來電索要詳細說明書！

二、需自備試劑和器材
1． 標準規(guī)格酶標儀。
2． 自動洗板機。
3.  37℃恒溫箱。
4． 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，最好用多通道移液器。
5． 使用中性 PBS 或 TBS 作為洗滌液。
6  蒸餾水。
7. 吸水紙。

三、樣品的準備和保存
植物組織的提取，不管是根莖組織還是葉片組織還是果實組織，都應該采用鮮重的計重方式：
一般要遵循以下原則：
1，稱取的組織重量不能低于50mg。
2，勻漿的比例按照10%，即1g組織加9ml的勻漿液，勻漿液一般選取PBS（PH=7.2-7.4）
3，組織在勻漿器勻漿過程中，勻漿液應該分2次加進去，這樣勻漿更充分。
4，充分勻漿完成后離心取上清，離心機的轉數(shù)選取2000-3000轉每分，轉數(shù)不宜超過5000.離心時間為15-30分鐘！

四、操作注意事項
1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。
2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結果乘以5才是樣本實際濃度。
4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

五、洗板方法
1、手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2、自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

六、實驗詳細操作程序
1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；樣本孔加待測樣本50μL。
3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

七、結果判斷:
繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
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