組織細(xì)胞非變性裂解液

貨號：ZK-PL4194

規(guī)格：100ml 500ml

描述：

非變性細(xì)胞裂解液(Nondenaturing Lysis Buffer, C1050)內(nèi)含非離子型去垢劑和鹽，能裂解細(xì)胞并在非變性條件下釋放胞漿蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非變性條件下的裂解蛋白產(chǎn)物最大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗體結(jié)合能力或酶學(xué)活性，因此適宜于進(jìn)行免疫共沉淀。另外，有些抗體對非變性蛋白具有更高的結(jié)合能力或只能識別非變性蛋白的抗原位點(diǎn)，在這種情況下，應(yīng)該使用非變性細(xì)胞裂解液制備總蛋白。

儲(chǔ)存：

4℃保存 12個(gè)月有效

操作步驟：

制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物：

1. 800g 4℃離心5分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞，而后用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞兩次。估計(jì)細(xì)胞離心后的體積（PCV,106cells=~20ul, 107cells =~100ul PCV）；

2. 每50～100ul PCV加入5倍體積非變性組織細(xì)胞裂解液（250~500ul）,渦旋震蕩10秒，冰浴放置20分鐘；

3. 12000g 4℃離心15分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物，

制備組織裂解產(chǎn)物：

1. 取50-100mg組織在冰上剪成碎片，用預(yù)冷的PBS洗滌2次離心棄去PBS；

2. 加入0.5-1ml預(yù)冷的非變性組織細(xì)胞裂解液；

3. 4℃用玻璃勻漿器勻漿20-40次，直到95％的細(xì)胞被破碎，渦旋震蕩10秒，冰浴放置20分鐘；

4. 12000g4℃離心15分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物，可用于后續(xù)的免疫沉淀或者Western Blot等實(shí)驗(yàn)。

注意：

1. 在轉(zhuǎn)移上清液時(shí)不要吸入底部的沉淀物；

2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀時(shí)最好在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行蛋白的提取，以避免某些不穩(wěn)定蛋白的降解；

3. 在該裂解緩沖液中未加入蛋白酶抑制劑，用戶可自行選擇進(jìn)行添加。