?RIPA裂解液（帶PMSF)

英文名稱：RIPA Lysis Buffer+PMSF

規(guī)格：100ml

貨號：ZK-PL3497

描述：

RIPA裂解液對動物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分有較強(qiáng)裂解作用，是常用的細(xì)胞組織快速裂解液。使用RIPA 裂解液加強(qiáng)型特別適于western blot和大多數(shù)蛋白-蛋白相互作用的實(shí)驗(yàn)等。PMSF能抑制蛋白酶對蛋白的降解。

儲存：

RIPA裂解液 100ml 4 ℃保存

PMSF粉末 （100mM） -20℃保存

PMSF溶劑 1ml  -20℃保存

以上組分12個月有效

制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物（預(yù)先將PMSF溶劑加入PMSF粉末中混勻，按1:99比例加入RIPA裂解液中）

1.800g4℃離心5分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞，估計(jì)細(xì)胞離心后的體積（PCV,106cells=~20ml, 107cells =~100mlPCV）；

2.每50-100ml PCV加入5倍體積RIPA裂解緩沖液（250-500ml）,冰浴中放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；

3.12000g4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物；

4.假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，95℃加熱5分鐘，然后迅速冰浴5分鐘，12000g4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物。

制備組織裂解產(chǎn)物（預(yù)先將PMSF溶劑加入PMSF粉末中混勻，按1:99比例加入RIPA裂解液中）

1.取50-100mg組織在冰上剪成碎片，用預(yù)冷的PBS洗滌2次離心棄去PBS；

2.加入0.5-1ml預(yù)冷RIPA裂解緩沖液；

3.4℃用玻璃勻漿器勻漿20-40次，直到95％的細(xì)胞被破碎，然后在冰浴中放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；

4.12000g4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物；

5.假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，95℃加熱5分鐘，然后迅速冰浴5分鐘，12000g4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物；

6.20％的甘油保存于-70oC 或-20oC。

注意：

1.在轉(zhuǎn)移上清液時(shí)不要吸入底部的沉淀物；

2.在做免疫沉淀或免疫共沉淀時(shí)最好在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行蛋白的提取，以避免某些不穩(wěn)定蛋白的降解；

3.PMSF溶液易降解，請于-20oC保存，按比例現(xiàn)用現(xiàn)加。