?細(xì)菌總蛋白非變性提取試劑

貨號(hào)：ZK-PL3510

產(chǎn)品描述：

細(xì)菌蛋白提取試劑Ⅰ(非變性)采用溫和的非離子型去污劑，能夠從細(xì)菌中提取得到可溶性蛋白，用細(xì)菌蛋白提取試劑Ⅰ(非變性)制備的蛋白產(chǎn)物保持了生物學(xué)活性，適用于后續(xù)的Western Blot、免疫沉淀、免疫共沉淀、蛋白純化等實(shí)驗(yàn)。

適用范圍：

從新鮮或者凍存的細(xì)菌中提取蛋白。

規(guī)格：

25ml 或 100mL.

儲(chǔ)存:

4℃保存 12個(gè)月有效

提取方法：

1. 將細(xì)菌培養(yǎng)物在預(yù)先稱重的離心管中4oC，5000g離心15分鐘，收集菌體；

2. 去上清，稱量菌體重量，按照每克菌體加入10-50ml細(xì)菌蛋白提取試劑Ⅰ(非變性)，渦旋震蕩使菌體完全重懸；

3. 室溫孵育15-20分鐘（孵育時(shí)間可根據(jù)細(xì)胞類型的不同做調(diào)整)。如果蛋白表達(dá)量低，建議結(jié)合超聲粉碎，置冰上后，采用300w,10s超聲/10s間隔,超聲20min，至菌液變清；若目的蛋白不穩(wěn)定，可冰孵，且時(shí)間可以減少，裂解液內(nèi)加入0.2倍體積50%甘油也可以穩(wěn)定目的蛋白。

4. 15000g，離心10分鐘；

5. 將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管中，即得到可溶性蛋白，可應(yīng)用BCA法進(jìn)行蛋白定量及后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意：

1. 該抽提試劑中不含有蛋白酶抑制劑，用戶可根據(jù)具體情況添加蛋白酶抑制劑、還原劑、螯合劑等。

2. 當(dāng)提取物粘度較高或提取的蛋白以包涵體形式存在時(shí)，建議在加入溶菌酶和DNaseⅠ.

3. 如果在提取純化過表達(dá)蛋白的過程中，得到的大部分蛋白都在沉淀中，那么目的蛋白可能以包涵體的形式存在，可使用包涵體蛋白溶解液進(jìn)行溶液，也可以優(yōu)化蛋白表達(dá)條件，增加可溶性蛋白的表達(dá)。