?線粒體和胞漿蛋白制備試劑盒

貨號(hào)：ZK-PL3522

規(guī)格：50次 100次

描述：線粒體和胞漿蛋白制備試劑盒 (Mitochondria Isolation Kit)用于從組織或培養(yǎng)細(xì)胞中分離線粒體和細(xì)胞胞漿成分。加入分離溶液，勻漿破碎組織細(xì)胞，經(jīng)過數(shù)次800g和12000g離心，在60分鐘內(nèi)即可分離出完整的線粒體和胞漿成分。制備的線粒體具有很高的生物學(xué)活性，可進(jìn)行各種功能研究如酶學(xué)測定，更可用于Western Blot,2D-膠、線粒體蛋白或DNA提取、蛋白質(zhì)組學(xué)等研究。嚴(yán)格按照說明操作，總是能制備獲得高純度線粒體。一篇方法學(xué)研究論文發(fā)現(xiàn)，用普利萊試劑盒制備線粒體的得率、活性、純度優(yōu)于蔗糖密度梯度離心法和Invotrogen/Pierce線粒體提取試劑盒方法。

特點(diǎn)：

1、 操作簡單，可在一小時(shí)內(nèi)完成。

2、 實(shí)驗(yàn)室常規(guī)設(shè)備即可，無需超速離心。

3、 制備的線粒體具有高活性，可用于后續(xù)的各類實(shí)驗(yàn)分析。

規(guī)格：

50次 100次

儲(chǔ)存：

?20°C 一年有效

操作步驟：（注意：以下所有操作均在4°C進(jìn)行）

1. 樣品處理：組織勻漿：取100~200mg新鮮組織樣品，剪為0.5cm2的碎塊放入玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.5mL冰預(yù)冷的MitoSolution。研磨組織20次。培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：800g5min離心收集細(xì)胞。單次提取需2-5×107個(gè)細(xì)胞。加入1.5 mL冰預(yù)冷MitoSolution重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)研磨細(xì)胞30次。

2. 將勻漿液轉(zhuǎn)移到離心管中,800g,4oC離心5min。

3. 取上清液。再次800g,4oC 離心5min。

4. 將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管。10,000g,4oC離心10min。線粒體沉淀在管底。離心后的上清含胞漿成分，可收集用于對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

5. 洗滌線粒體：加入0.2mLMitoSolution，輕彈管底重懸線粒體沉淀；12,000g,4oC離心10min棄上清，線粒體沉淀在管底。

6. 重懸線粒體：可以用MitoSolution重懸線粒體沉淀,也可以用合適后續(xù)實(shí)驗(yàn)的自備緩沖液來裂解線粒體沉淀，具體用量是：約每100mg組織提取的線粒體用50μl，約每5×107個(gè)細(xì)胞提取的線粒體用100μl.用量請(qǐng)根據(jù)組織或細(xì)胞類型進(jìn)行微調(diào)。

7. 裂解線粒體后，進(jìn)行蛋白濃度測定。立即使用或?70oC保存。