?膜-膠10秒快速染色液

貨號：ZK-PL3689?

描述：

膜-膠10秒快速染色液是Dual-Dye染料的水溶液，不含有毒化學品，可對PVDF和NC膜以及聚丙烯酰胺凝膠蛋白進行快速染色。靈敏度極高，可檢測10ng蛋白條帶，而麗春紅膜染色靈敏度為1000ng，蘇丹黑為500ng。本產品不使用醋酸和甲醇等有毒物質，染色劑可直接溶于水。膜染色1-2分鐘即可完畢，條帶清晰為紫褐色，背景染色極低。新鮮或陳舊的干燥膜均可染色。染色條帶清晰不退色，可直接掃描或照相。染色完全可逆，染過的膜在含0.05% Tween 20的封閉液封閉即可脫色，也可在堿性條件下數(shù)秒內完全脫色。不影響后續(xù)Western Blot。適用于硝酸纖維素膜、PVDF膜、尼龍膜。用于監(jiān)測蛋白轉膜，膜染色蛋白條帶可用做Western Blot內對照?？梢苑磸褪褂?-4次。MemGel Stain染液可直接用于硝酸纖維素膜和PVDF膜快速染色。1：1稀釋后可用于聚丙烯酰胺凝膠蛋白快速染色。SDS-聚丙烯酰胺凝膠在蒸餾水或甲醇-醋酸溶液中洗滌30分鐘，浸入適量的醋酸-甲醇溶液和等量的膜-膠10秒快速染色液染色2-10分鐘即可顯示蛋白條帶。只需在甲醇-醋酸溶液脫色10分鐘即可得到背景干凈的蛋白條帶。50分鐘完成染色，靈敏度為50ng/條帶，高于考馬斯亮蘭方法。凝膠染色液可反復使用2-4次。

適用：

直接用于硝酸纖維素膜和PVDF膜快速染色。1：1稀釋后可用于聚丙烯酰胺凝膠蛋白染色快速染色。監(jiān)測轉膜、

染色蛋白條帶，用做Western Blot內對照。

組成：

Dual-Dye水溶液100或250ml。可重復使用2-4次，可染色200-500個mini-gel轉移膜；1：1稀釋可配制200或500ml凝膠

染色工作液，并可重復使用2-3次。染200-500個以上mini-gel。

儲存：

室溫保存12個月有效

安全性：

Dual-Dye無特殊毒性，按一般化學品操作規(guī)程處理。

效果展示：

圖：MemGel Stain (左)與麗春紅(右)染色的比較。
硝酸纖維素轉移膜蛋白染色。同一張膜先用麗春紅染色（右圖），然后洗去染色，接著用MemGel Stain染色（左圖）。MemGel Stain染色條帶清晰銳利，靈敏度高。

操作步驟：

PVDF/NC膜染色：

1.將PVDF膜或NC膜完全浸入染色工作液，室溫1-2分鐘，膜上出現(xiàn)紫褐色蛋白條帶。若蛋白豐富則10秒鐘即可達到最佳對比度。沒有蛋白條帶表明膜上沒有蛋白。

2.取出膜，掃描或照相。如果染色背景較深，可用蒸餾水清洗背景染色，直到出現(xiàn)滿意的對比度。在水中停留更長時間會緩慢洗去部分染色，但條帶仍清晰可見。脫色過度可以重新染色。染過色的膜可干燥保存。

3.將染色膜直接放入含去垢劑的封閉緩沖液中封閉(150mM NaCl,20mM Tris-Cl pH7.4,5% defat milk, 0.05%Tween20)。1小時后膜染色將完全褪去，不影響后續(xù)Western Blot操作。另外，將膜浸入0.05-0.1N NaOH水溶液中，數(shù)十秒內即可完全清除膜染色，不影響后續(xù)Western Blot操作。

聚丙烯酰胺凝膠蛋白染色溶液配制：

配制50%甲醇(或乙醇)-2%醋酸溶液：

甲醇(或乙醇)50ml(自備)

冰醋酸2ml(自備)

蒸餾水48ml

室溫保存。

配制1X凝膠染色工作液：

MemGel Stain Solution  50ml

甲醇(或乙醇)50 ml

冰醋酸2ml

室溫保存。

聚丙烯酰胺凝膠蛋白染色程序：

1.SDS-聚丙烯酰胺凝膠在蒸餾水或50%甲醇(或乙醇)-2%醋酸溶液中洗滌2次，每次15~30分鐘。如果聚丙烯酰胺凝膠不含SDS，可省略洗滌步驟直接進行下面的染色。

2.凝膠浸入1X凝膠染色工作液，2-3min即顯示紫褐色蛋白條帶，10~20min可達到最大染色。

3.取出凝膠，放入50%甲醇(或乙醇)-2%醋酸溶液脫色10分鐘，直到完全洗去背景染色。

說明：

1.如果是干燥的PVDF膜，染色前應該先用甲醇或乙醇浸泡濕潤，然后用水沖洗。

2.膜染色可在蛋白轉移之后立即進行，或在完成Western Blot后進行。

3.正如可用DNA或RNA瓊脂糖凝膠電泳條帶照相判斷Southern或Northern Blot加樣量一樣，膜染色條帶極其清晰并與條帶蛋白含量成正比，因而可用做Western Blot的內對照。

4.膜染色或凝膠染色之后，染色液可以回收，裝入新容器內，室溫或4oC保存，可反復使用2-4次。