?一、小鼠IgG1/2a/2b亞類單抗腹水純化試劑盒

      貨號(hào)：ZK-B1690Y（50mL純化量）

二、試劑原理：

本試劑盒利用不同蛋白需要的沉淀試劑和沉淀?xiàng)l件不同，通過大量實(shí)驗(yàn)分析驗(yàn)證而得到的一個(gè)與傳統(tǒng)沉淀純化相比有較大不同的精細(xì)的具有高活性、高產(chǎn)率、快速以及良好重復(fù)性的單克隆抗體的純化方法。

三、試劑特點(diǎn)：

本試劑盒特點(diǎn)在于純化操作的簡(jiǎn)單化、所得抗體保持高活性和較高純度。實(shí)驗(yàn)表明，本試劑盒可以得到90%左右純度的抗體；并且由于配方考究，抗體在純化過程中幾乎沒有損傷，完全保持應(yīng)有的活性；重復(fù)性和實(shí)際應(yīng)用極好。

四、適用范圍：

本試劑盒適用于小鼠IgG類包含IgG1\IgG2a\IgG2b亞類的單克隆抗體腹水的純化，不能用于IgG3、IgM和IgA類單克隆抗體腹水的純化實(shí)驗(yàn)，如需要可選擇本公司其它貨號(hào)的純化試劑，它能為您帶來良好的結(jié)果。

五、試劑組成：

六、純化步驟：

1、 從冰箱中取出試劑盒放置室溫恢復(fù)溫度30分鐘，期間可將單克隆抗體腹水從冰箱中取出，室溫復(fù)溫15分鐘，隨后用自來水邊沖邊搖勻快速解凍。

2、 將化開的單克隆抗體腹水8000-12000RPM， 4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10分鐘。

3、 離心完畢上面若有浮沫和油脂先吸棄，然后將上清轉(zhuǎn)出到另一個(gè)干凈容器或離心管；按每1mL單克隆抗體腹水加入純化液A（加前確定沒有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可） 1mL（必須精確），使用搖床或者旋轉(zhuǎn)混勻儀室溫到37℃溫度區(qū)間內(nèi)混勻30分鐘。

4、 8000RPM，4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10-20分鐘，沉淀用純化液B溶解到原單克隆抗體腹水1/2體積，再按此體積每1mL加入純化液C （加前確定沒有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可）1mL（（必須精確），使用搖床或者旋轉(zhuǎn)混勻儀室溫到37℃溫度區(qū)間內(nèi)混勻10分鐘。

5、 8000RPM，4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10-20分鐘，棄沉淀收集上清；每1mL上清液加純化液D（加前確定沒有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可）  1mL（必須精確），使用搖床或者旋轉(zhuǎn)混勻儀室溫到37℃溫度區(qū)間內(nèi)混勻20分鐘。

6、 8000RPM，4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10-20分鐘，收集沉淀用純化液B收集溶解沉淀到原單克隆抗體腹水體積的1/3。透析袋用純水浸泡3-5分鐘，然后用手揉捏數(shù)次，接純水沖洗干凈，抗體放入扎好。透析液是用純水溶解透析試劑到8L（也可先全部溶解到800mL，使用時(shí)10X稀釋），透析依照抗體體積：透析液體積=1:100以上，4℃透析過夜。收集透析后抗體。

7、 以透析后抗體體積：純化液E的體積=9：1的比例加入純化液E搖勻（也就是9體積抗體加1體積純化液E），靜置5min。8000RPM,4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10分鐘，棄沉淀收集上清即為純化好的抗體。

8、 將純化好的抗體放入用透析夾或繩扎緊?？贵w體積：透析液體積=1:50以上；4℃透析，中間換液三次，透析總時(shí)間不超過24小時(shí)。然后8000RPM, 4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10分鐘，收集上清測(cè)蛋白濃度后（可添加合適的防腐劑）-20℃存放備用。

七、儲(chǔ)存方法：建議避光存放在4℃（或2～8℃），不開啟保存效期1年。

八、 注意事項(xiàng)：

1、 溶血嚴(yán)重和變質(zhì)的腹水不得用于純化。

2、 離心溫度不要超過37℃。

3、 操作和量取試劑要細(xì)致精準(zhǔn),否則影響純度。

4、 不攪拌透析每次靜置透析時(shí)間不得低于4小時(shí)。

5、 如覺得透析太慢可以選擇超濾管。